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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

眼外肌是附著于眼球外部的肌肉。在肌肉周圍附有結(jié)締組織，結(jié)締組織是由成纖維細(xì)胞構(gòu)成，起到支持和保護(hù)作用。

細(xì)胞特性：

1）組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。

2)細(xì)胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽(yáng)性。。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 delf原代 成纖維 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： PPARγ ELISA Kit

Rat 8 hydroxydeoxyguanosine (8-OHdG) ELISA Kit 大鼠8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)檢測(cè)試劑盒

Ratinsulinaoaibodies,IAAELISAKit 大鼠胰島素自身抗體(IAA)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforeNOS(RabbitEndothelialniicoxidesyhase)ELISAKit兔內(nèi)皮型合成酶

細(xì)胞氯乙?；D(zhuǎn)移酶(CAT)報(bào)告基因活性同位素定量檢測(cè)試劑盒20次

RatLeptin,LEPELISAKit大鼠瘦素(LEP)檢測(cè)試劑盒

CD40重組大鼠 CD40 / TNFRSF5 蛋白  Protein

G Protein(Guanine nucleotide-binding regulatory protein 0.5mgG Protein(Guanine nucleotide-binding regulatory protein) G蛋白(鳥苷酸結(jié)合蛋白)(抗原)

FAM3D重組人 FAM3D 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

AMPK Protein Human 重組人 AMPK (G1/B2/A2) Heterotrimer 蛋白

NEGR1 Protein Mouse 重組小鼠 NEGR1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

G Protein(Guanine nucleotide-binding regulatory protein 0.5mgG Protein(Guanine nucleotide-binding regulatory protein) G蛋白(鳥苷酸結(jié)合蛋白)(抗原)

AMPK Protein Human 重組人 AMPK (G1/B2/A2) Heterotrimer 蛋白

CD40重組大鼠 CD40 / TNFRSF5 蛋白  Protein

NEGR1 Protein Mouse 重組小鼠 NEGR1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

FAM3D重組人 FAM3D 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

豬氧化酶(DAO)ELISA 試劑盒

Human Staphylococcus aureus eerotoxins (SE) ELISA Kit 人金葡菌腸毒素(SE)檢測(cè)試劑盒

PorcineHydrocoisone,HYDELISAKit 豬輕化1(HYD)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAlpha2-MG(HumanAlpha2macroglobulin)ELISAKit人α2巨球蛋白

血液(lithium)化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒50次

NudemouseAlpha-fetoprotein,AFPELISAKit裸鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)檢測(cè)試劑盒

兔眼外肌成纖維細(xì)胞豬白介素1受體拮抗劑檢測(cè)試劑盒   豬白介素1受體拮抗劑試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬白介素1受體拮抗劑試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬白介素1受體拮抗劑試劑盒、豬白介素1受體拮抗劑eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

豬白介素1β檢測(cè)試劑盒   豬白介素1β試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬白介素1β試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬白介素1β試劑盒、豬白介素1βeisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

豬白介素1α檢測(cè)試劑盒   豬白介素1α試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬白介素1α試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬白介素1α試劑盒、豬白介素1αeisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

豬γ干擾素檢測(cè)試劑盒   豬γ干擾素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬γ干擾素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬γ干擾素試劑盒、豬γ干擾素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。