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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Rat TNF-α protein

產(chǎn)品中文名稱：重組大鼠腫瘤壞死因子-α（TNF-α）

規(guī)格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

貨號(hào)：EY-01X8637
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

標(biāo)簽:無標(biāo)簽

表達(dá)宿主:大腸桿菌

種屬:大鼠

序列:氨基酸序列來源于： 鼠源 TNF-α (P16599) (Leu80-Leu235) 表達(dá)的蛋白片段。

活性:使用L929小鼠纖維肉瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)。這種效應(yīng)的ED50為100 pg/mL。

蛋白長(zhǎng)度：重組大鼠TNF-α由156個(gè)氨基酸組成，預(yù)測(cè)分子量為 17.2 KD。

純度:> 98 % ，使用SDS-PAGE檢測(cè)

采用 LAL 法檢測(cè)，每 1 μg 蛋白質(zhì)中的 EU 含量小于 0.1。

產(chǎn)品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無菌的 50mM NaCl動(dòng)?動(dòng)

背景

腫瘤壞死因子α（TNF-α），也稱為惡液質(zhì)素和TNFSF2，是由脂肪細(xì)胞、活化的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌的多效性促炎細(xì)胞因子。它屬于T腫瘤壞死因子配體家族，可通過兩個(gè)受體TNFR1和TNFR2發(fā)出信號(hào)。 TNF-α對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒性，是介導(dǎo)針對(duì)細(xì)菌感染的免疫反應(yīng)的重要因素。TNF-α還在感染性休克，自身免疫性疾病，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，炎癥和糖尿病的誘導(dǎo)中也起作用。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷。可直接加入到檢測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

ARIP2a(Activin receptor 2A 0.5mgARIP2a(Activin receptor 2A) 激活素受體2A/激活素受體相互作用蛋白2a抗原

CLEC12A Protein Human 重組人 CLEC12A / CLL-1 / DCAL2 蛋白

IL36RN重組小鼠 IL1F5 / IL1RP3 蛋白 Protein

ERBB4 Protein Rat 重組大鼠 HER4 / ErbB4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

MAPKAPK5重組人 MAPKAPK5 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human rotavirus aigen (RV Ag) ELISA Kit 人輪狀病毒抗原(RV Ag)檢測(cè)試劑盒

HumanPhospholipaseCγ1,PLCγ1ELISAKit 人0酯酶Cγ鏈(PLCγ1)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Duckcarbonicanhydrase,CA檢測(cè)試劑盒鴨子酶(CA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞組蛋白H3-K4甲基化熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒(針對(duì)二甲基、基)10/20次

MouseDopamineD1receptor,D1RELISAKit小鼠多巴胺D1受體(D1R)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠6前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠戊糖素(Peosidine)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠乳酸脫氫酶B(LDHB)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： LDHB ELISA Kit

Mouse vasoactive iestinal peptide (VIP) ELISA Kit 小鼠血管活性腸肽(VIP)檢測(cè)試劑盒

Ratsexhormone-bindingglobulin,SHBGELISAKit 大鼠性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGzms-B(MousegranzymesB)ELISAKit小鼠顆粒酶B

細(xì)胞二(MDA)比色法定量檢測(cè)試劑盒50次

RatVascularEndothelialcellGrowthFactorB,VEGF-BELISAKit大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B(VEGF-B)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

重組大鼠腫瘤壞死因子-α（TNF-α）IL36RN重組小鼠 IL1F5 / IL1RP3 蛋白 Protein

ARIP2a(Activin receptor 2A 0.5mgARIP2a(Activin receptor 2A) 激活素受體2A/激活素受體相互作用蛋白2a抗原

MAPKAPK5重組人 MAPKAPK5 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

CLEC12A Protein Human 重組人 CLEC12A / CLL-1 / DCAL2 蛋白

ERBB4 Protein Rat 重組大鼠 HER4 / ErbB4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。