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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠淋巴分離自組織；是機(jī)體的重要淋巴器官，其功能與免疫緊密相關(guān)，是T細(xì)胞分化、發(fā)育、成熟的場(chǎng)所。其還可以分泌激素及激素類物質(zhì)，具內(nèi)分泌機(jī)能的器官。位于胸腔前縱隔。胚胎后期及初生時(shí)，是一生中重量相對(duì)大的時(shí)期。隨年齡增長(zhǎng)，繼續(xù)發(fā)育；此后逐漸退化，淋巴細(xì)胞減少，脂肪組織增多。的結(jié)構(gòu)表面有結(jié)締組織被膜，結(jié)締組織伸入實(shí)質(zhì)把分成許多不分隔的小葉。小葉周邊為皮質(zhì)，深部為髓質(zhì)。皮質(zhì)不包圍髓質(zhì)，相鄰小葉髓質(zhì)彼此銜接。皮質(zhì)主要由淋巴細(xì)胞和上皮性網(wǎng)狀細(xì)胞構(gòu)成，胞質(zhì)中有顆粒及泡狀結(jié)構(gòu)。網(wǎng)狀細(xì)胞間有密集的淋巴細(xì)胞。的淋巴細(xì)胞又稱為細(xì)胞，在皮質(zhì)淺層細(xì)胞較大，為較原始的淋巴細(xì)胞。中層為中等大小的淋巴細(xì)胞，深層為小淋巴細(xì)胞。從淺層到深層為造血干細(xì)胞增殖分化為小淋巴細(xì)胞的過(guò)程。皮質(zhì)內(nèi)還有巨噬細(xì)胞，無(wú)淋巴小結(jié)。髓質(zhì)中淋巴細(xì)胞少而稀疏，上皮性網(wǎng)狀細(xì)胞多而顯著。形態(tài)多樣，胞質(zhì)中有顆粒及泡狀結(jié)構(gòu)，為其分泌物，尚有散在的圓形的小體。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠淋巴采用機(jī)械研磨法結(jié)合密度梯度離心法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為1×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠淋巴經(jīng)過(guò)檢測(cè)，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 懸浮

細(xì)胞形態(tài) 圓形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠線粒體乙脫氫酶(ALDM)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： ALDM ELISA Kit

Pla vitamin D (VD) ELISA Kit 植物(VD)檢測(cè)試劑盒

MouseEndostatin,ESELISAKit 小鼠內(nèi)皮抑素(ES)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanAmylinELISAKit人胰淀素

細(xì)胞HCV(HEPATITISVIRUSC)病毒定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitER大鼠雌二醇受體

IL1R1重組小鼠 IL1R1 / CD121a 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

酸激酶(PK)重組蛋白 Recombinant Pyruvate Kinase, Liver And RBC (PK)

GCSH重組人 GCSH 蛋白 Protein

CD59 Protein Human 重組人 CD59 蛋白

CD200 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD200 蛋白

酸激酶(PK)重組蛋白 Recombinant Pyruvate Kinase, Liver And RBC (PK)

CD59 Protein Human 重組人 CD59 蛋白

IL1R1重組小鼠 IL1R1 / CD121a 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CD200 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD200 蛋白

GCSH重組人 GCSH 蛋白 Protein

小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) ELISA Kit 人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)檢測(cè)試劑盒

Humankeratansulfate,KSELISAKit 人硫酸角質(zhì)素(KS)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Camelansforminggrowthfactorsβ2,TGFβ2檢測(cè)試劑盒轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

玉米葉片原生質(zhì)細(xì)胞分離試劑盒5次

Mouseinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISAKit小鼠誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠胸腺淋巴細(xì)胞小鼠血小板反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑盒   小鼠血小板反應(yīng)蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠血小板反應(yīng)蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠血小板反應(yīng)蛋白試劑盒、小鼠血小板反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠血紅素氧合酶檢測(cè)試劑盒   小鼠血紅素氧合酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠血紅素氧合酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠血紅素氧合酶試劑盒、小鼠血紅素氧合酶檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠血管性血友病因子檢測(cè)試劑盒   小鼠血管性血友病因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠血管性血友病因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠血管性血友病因子試劑盒、小鼠血管性血友病因子檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠胰島素原檢測(cè)試劑盒   小鼠胰島素原試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠胰島素原試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠胰島素原試劑盒、小鼠胰島素原檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。