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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

人表皮角化分離自皮膚組織；表皮位于動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。表皮角化細胞（KC）是構(gòu)成表皮的主要細胞成分，在體內(nèi)處于不斷增殖過程中，分裂的角化細胞主要位于其基底層，少數(shù)位于棘細胞層。隨著向表層的推移，細胞的分化程度逐漸增加，并喪失分裂活性。

方法簡介：

公司實驗室分離的人表皮角化先消化、后-膠原酶混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人表皮角化經(jīng)PCNA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA 試劑盒

People of cyclooxygenase 2 (COX-2) ELISA Kit 人環(huán)加氧酶2(COX-2)檢測試劑盒

Rabbiturokinaseplasminogenactivator,uPAELISAkit 兔型纖溶酶原激活物(uPA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforAP13(Humanapelin13)ELISAKit人apelin13

血清樣品樹脂法去內(nèi)毒素試劑盒20次

PorcineIerleukin18,IL-18ELISAKit豬白介素18(IL-18)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

CD3D重組小鼠 CD3d / CD3 delta 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

多功能肽酶2(LMP2)重組蛋白 Recombinant Large Multifunctional Peptidase 2 (LMP2)

MZB1重組人 MZB1 / PERP1 蛋白 Protein

CDH17 Protein Human 重組人 Cadherin-17 / LI-cadherin / CDH17 蛋白

TGFBR2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 TGFBR2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

多功能肽酶2(LMP2)重組蛋白 Recombinant Large Multifunctional Peptidase 2 (LMP2)

CDH17 Protein Human 重組人 Cadherin-17 / LI-cadherin / CDH17 蛋白

CD3D重組小鼠 CD3d / CD3 delta 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

TGFBR2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 TGFBR2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

MZB1重組人 MZB1 / PERP1 蛋白 Protein

小鼠細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human phospho protein kinase C (P-PKC) ELISA Kit 人0酸化蛋白激酶C(P-PKC)檢測試劑盒

HumanLipoxinA4,LXA4ELISAKit 人脂氧素A4(LXA4)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenInsulin-likegrowthfactors1,IGF-1檢測試劑盒雞胰島素樣生長因子1(IGF-1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞DAPKINASE蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MousegranzymesA,Gzms-AELISAKit小鼠顆粒酶A(Gzms-A)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人表皮角化細胞小鼠心素(mouse ANP)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠凋亡誘導(dǎo)因子(mouse AIF)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠抗利尿激素/血管加壓素(mouse AVP/ADH)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠固(mouse ALD)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝