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細胞簡介：

人NK分離自人外周血單個核細胞；NK細胞即自然殺傷細胞（natural killer cell，NK）是機體重要的免疫細胞，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生，能夠識別靶細胞、殺傷介質(zhì)。NK細胞來源于骨髓淋巴樣干細胞，其分化、發(fā)育依賴于骨髓及微環(huán)境，主要分布于骨髓、外周血、肝、脾、肺和淋巴結(jié)。NK細胞不同于T、B細胞，是一類無需預(yù)先致敏就能非特異性殺傷腫瘤細胞和病毒感染細胞的淋巴細胞。由于NK細胞的殺傷活性無MHC限制，不依賴抗體，因此稱為自然殺傷活性。NK細胞胞漿豐富，含有較大的嗜天青顆粒，顆粒的含量與NK細胞的殺傷活性呈正相關(guān)。NK細胞作用于靶細胞后殺傷作用出現(xiàn)早，在體外1小時、體內(nèi)4小時即可見到殺傷效應(yīng)。NK細胞的靶細胞主要有某些腫瘤細胞（包括部分細胞系）、病毒感染細胞、某些自身組織細胞（如血細胞）、寄生蟲等，因此NK細胞是機體抗腫瘤、抗感染的重要免疫因素，也參與第Ⅱ型超敏反應(yīng)和移植物抗宿主反應(yīng)。

方法簡介：

公司實驗室分離的人外周血NK采用取外周血、通過密度梯度離心、差速貼壁、細胞因子誘導(dǎo)法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人源NK經(jīng)CD56免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含IL-2、IL-15、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態(tài) 短梭形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠基轉(zhuǎn)移酶(ALT)檢測試劑盒 ，英文名： ALT ELISA Kit

Mouse alpha glathione S ansferase (-GST) ELISA Kit 小鼠αS轉(zhuǎn)移酶(α-GST)檢測試劑盒

ELISA 小鼠促卵泡素(mouse FSH)  進口分裝

CLIAKitfom-1(MouseKidneyinjurymolecule1)ELISAKIT小鼠腎損傷分子1

通用型蛋白電泳考馬斯亮藍染色試劑盒10次

ELISAKitTGF-α大鼠轉(zhuǎn)化生長因子α

PRDX5重組小鼠 Peroxiredoxin 5 / PRDX5 蛋白 Protein

V-Rel網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒癌基因同源物A(RELA)重組蛋白 Recombinant V-Rel Reticuloendotheliosis Viral Oncogene Homolog A (RELA)

RAMP3重組人 RAMP3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

HSPD1 Protein Human 重組人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

BTLA Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 BTLA 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

干擾素α4(IFNα4)重組蛋白 Recombinant Interferon Alpha 4 (IFNa4)

HSPD1 Protein Human 重組人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

SMAD5重組小鼠 Smad5 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

FCGR3 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD16 / FCGR3 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated

GPD1重組人 GPD1 / Glycerolphosphate Dehydrogenase 1 蛋白 Protein

小鼠CD8分子(CD8)檢測試劑盒 96T/48T

Rat pepsin (Pepsin) ELISA Kit 大鼠(Pepsin)檢測試劑盒

Humancatecholamine,CAELISAKit 人兒茶酚胺(CA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCompleme1q,C1q檢測試劑盒人補體1q(C1q)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織a-(a-AMYLASE)活性CNPG3比色法定量檢測試劑盒20次

Humanpunjecellaoaibody,PCA-1/YoELISAKit人抗浦肯野細胞抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人源NK細胞兔骨橋素(OPN)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔鉤端IgG(Lebtospira)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔兒茶酚胺(CA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。