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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：小鼠腸黏膜上皮細(xì)胞

英文名稱：Mouse Intestinal Mucosal Epithelial Cells

組織來(lái)源：腸組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

小鼠腸黏膜上皮分離自腸道組織；腸道指的是從胃幽門至門的消化管。腸是消化管中長(zhǎng)的一段，也是功能重要的一段。哺乳動(dòng)物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進(jìn)行的，大腸主要濃縮食物殘?jiān)?，形成糞便，再通過(guò)直腸經(jīng)門排出體外。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實(shí)它的功能還遠(yuǎn)不止此——它還是機(jī)體內(nèi)大的微生態(tài)系統(tǒng)。腸黏膜上皮細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中，也是機(jī)體面對(duì)病原微生物的道防線。因此，腸黏膜上皮細(xì)胞除有吸收、分泌和轉(zhuǎn)運(yùn)等重要生理功能之外，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機(jī)制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細(xì)胞作為先接觸抗原的細(xì)胞，在黏膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用，它決定黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生、性質(zhì)和強(qiáng)度。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腸黏膜上皮采用先機(jī)械分離法、后膠原酶消化法并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi)，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠Apelin(APLN)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： APLN ELISA Kit

Mouse bone morphogenetic protein receptor II (BMPR- II) ELISA Kit 小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)檢測(cè)試劑盒

Mousefreefattyacids,FFAELISAKit 小鼠游離脂肪酸(FFA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumahymopein,TP-5ELISAKit人五肽

通用型煙草環(huán)斑病毒(TobaccoRingspotVirus;SV)試劑盒20次

ELISAKitHSP-90大鼠熱休克蛋白90

TNFRSF21重組人 DR6 / TNFRSF21 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

趨化因子C-X-C-基元受體3(CXCR3)重組蛋白 Recombinant Chemokine C-X-C-Motif Receptor 3 (CXCR3)

CD8B重組人 CD8B / P37 / LEU2 蛋白 Protein

GLIPR1 Protein Human 重組人 GLIPR1 / RTVP1 蛋白

HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/Beijing/22808/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

趨化因子C-X-C-基元受體3(CXCR3)重組蛋白 Recombinant Chemokine C-X-C-Motif Receptor 3 (CXCR3)

GLIPR1 Protein Human 重組人 GLIPR1 / RTVP1 蛋白

TNFRSF21重組人 DR6 / TNFRSF21 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/Beijing/22808/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

CD8B重組人 CD8B / P37 / LEU2 蛋白 Protein

小鼠白介素1β (IL-1β)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat mammary carcinoma marker-ca153 -CA153ELISA 大鼠癌標(biāo)志物-CA153檢測(cè)試劑盒

Humancalcitoningenerelatedpeptide,CGRPELISAKit 人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumancardiacoponinⅠ,cTn-Ⅰ檢測(cè)試劑盒人心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品35S試劑盒20次

HumanSolubleClusterofdiffereiation21,sCD21ELISAKit人可溶性CD21(CR2/sCD21)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠腸黏膜上皮細(xì)胞兔子基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子睪(T)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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