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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：小鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞

英文名稱：Mouse Placental Chorionic Trophoblast Cells

組織來(lái)源：胎盤組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

小鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層分離自胎盤組織；胎盤（placenta）是哺乳動(dòng)物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長(zhǎng)成的母子間交換物質(zhì)的過(guò)渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤從母體取得營(yíng)養(yǎng)，而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長(zhǎng)出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。絨毛膜是由滋養(yǎng)層和胚外中胚層的壁層構(gòu)成。胚泡植入子宮內(nèi)膜后，在胚泡表面形成許多絨毛樣的突起，以細(xì)胞滋養(yǎng)層為中軸，外裹合體滋養(yǎng)層，稱初級(jí)干絨毛。胚外中胚層長(zhǎng)入初級(jí)干絨毛的中軸，使初級(jí)干絨毛變成了次級(jí)干絨毛。當(dāng)絨毛膜的胚外中胚層內(nèi)形成血管網(wǎng)和結(jié)締組織，并與胚體內(nèi)的血管相通時(shí)，次級(jí)干絨毛改稱三級(jí)干絨毛。三級(jí)干絨毛末端的細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞形成細(xì)胞滋養(yǎng)層殼。隨著胚胎發(fā)育，叢密絨毛膜與基蛻膜共同構(gòu)成了胎盤，而平滑絨毛膜則和包蛻膜一起逐漸與壁蛻膜融合。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層采用-DNA酶聯(lián)合消化法結(jié)合密度梯度離心法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層經(jīng)Cytokeratin-7免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： α-SMA ELISA Kit

Mouse oxytocin (OT) ELISA Kit 小鼠催產(chǎn)素(OT)檢測(cè)試劑盒

ELISA 小鼠血小板源生長(zhǎng)因子-BB(mouse PDGF-BB)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforIgMELISAKit大鼠免疫球蛋白M

通用型牛布氏桿菌(Brucellaabous)試劑盒20次

大鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4ELISAKit大鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4ELISAKit，大鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4ELISAKit，

ICOS重組大鼠 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

ED-1 (Ectodermal Dysplasia 1 0.5mgED-1 (Ectodermal Dysplasia 1) 外胚層發(fā)育不良抗原

HDAC3重組人 HDAC3 / Histone deacetylase 3 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

DCX Protein Human 重組人 DCX 蛋白 (aa 45-150, GST 標(biāo)簽)

JAM3 Protein Mouse 重組小鼠 JAM3 / JAM-C 蛋白

ED-1 (Ectodermal Dysplasia 1 0.5mgED-1 (Ectodermal Dysplasia 1) 外胚層發(fā)育不良抗原

DCX Protein Human 重組人 DCX 蛋白 (aa 45-150, GST 標(biāo)簽)

ICOS重組大鼠 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

JAM3 Protein Mouse 重組小鼠 JAM3 / JAM-C 蛋白

HDAC3重組人 HDAC3 / Histone deacetylase 3 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human hydroxyproline (Hyp) ELISA Kit 人羥脯(Hyp)檢測(cè)試劑盒

Humanai-thymocyteglobulin,ATGELISAKit 人抗細(xì)胞球蛋白(ATG)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanAgrin檢測(cè)試劑盒人聚集蛋白(Agrin)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(NAT)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

MouseADisiegrinAndMetalloprotease8,ADAM8ELISAKit小鼠解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-1(mouse MMP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2(mouse MMP-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-3(mouse MMP-3)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9(mouse MMP-9)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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